蛋白樣品制備詳解—雜質去除篇

蛋白樣品制備中，在細胞破碎之后，既可以利用特定蛋白質的特性來分離某一類蛋白質，比如親和純化，比如前面介紹的磷酸化蛋白富集，或者膜蛋白富集；另外一個考慮方向是去除雜質----去掉樣品中某些非目標高豐度蛋白或者雜質的干擾，同樣可以達到簡化樣本的目的。當然要小心“倒洗腳水的時候別把嬰兒也倒掉了"，一定要選擇可靠的產(chǎn)品。

比如，潛在疾病標志物的最好樣本來源就是血清或其他體液，此類樣本可以提供人蛋白質組中絕大部分組份。然而用蛋白質組分析方法鑒定疾病標志物最大的挑戰(zhàn)來自于血清中大量的高豐度蛋白對檢測的干擾，血清中有大約55%的蛋白為白蛋白，而IgG大約占血清中蛋白總量的10-25%，這些高豐度蛋白的存在會增加低豐度蛋白檢測的難度，去除占血清總蛋白近75%的白蛋白和IgG將有助于更好地鑒定其他的蛋白。G-Biosciences的AlbuminOUT™白蛋白去除試劑盒堪稱白蛋白去除神器。血漿和腦脊髓液等樣本中，包含大量的白蛋白，從而封閉掉在二維凝膠電泳中發(fā)現(xiàn)和鑒定其他低豐度蛋白的可能。AlbuminOUT™白蛋白去除試劑盒被設計用來在這種樣本中大量去除白蛋白。

這種白蛋白去除方法是基于白蛋白和Cibachron藍色染料的結合。AlbuminOUT™被優(yōu)化從樣本中去除人的白蛋白。AlbuminOUT™使用快速離心柱方法，每個柱子含有0.2ml的染料結合樹脂，從而可以結合大于2mg的人白蛋白。AlbuminOUT™可以從5-50微升人血漿中去除大于98%的白蛋白。

離心柱形式可以在10分鐘內(nèi)去除白蛋白。高結合力的藍色染料結合樹脂可以從人，豬，羊，狗，兔，大鼠和牛樣本中達到瞬間的結合和去除白蛋白。AlbuminOUT™或許也可以從其他物種中去除白蛋白。適用于處理25或50個樣本

Figure 1:  2D  analysis  of  whole  human  serum  before  (left)  and  after (right) treatment with AlbminOUT^™.

產(chǎn)品特點：

l 從樣本中不到10分鐘的時間內(nèi)去除白蛋白

l 基于白蛋白和Cibachron藍色染料的結合

l 每個柱子的結合力大于2mg的人白蛋白

l 從5-50微升人血漿中去除大于98%的白蛋白

去垢劑如SDS、Tween、Tritonde等是蛋白樣品處理過程中常用的組分。去污劑在蛋白提取和樣本制備過程中是很重要的物質，特別是研究疏水蛋白時。蛋白樣本中高濃度去污劑的存在能夠影響ELISA,IEF和蛋白的蛋白酶消化，以及用質譜進行分析時抑制肽的離子化。

所謂請神容易送神難。要除掉這些去垢劑？G-Biosciences推出的DetergentOUT™ GB-S10去污劑去除柱子和樹脂專門設計用來除于蛋白或其他生物樣本中所含有的去污劑，樹脂能夠從蛋白水溶液和肽樣本中去除自由的，未結合的陰離子的，非離子或兩性離子的去污劑(e.g. SDS, Triton® X-100 或CHAPS)，同時對于下游進行的質譜或其他技術的分析應用帶來最小的樣本丟失。

DetergentOUT™ GB-S10柱子在第三方的研究使用中表明*兼容DI-QTOF和 LC-MS/MS（請見參考文獻）。DetergentOUT™ GB-S10柱子的使用顯著增加到了檢測到的肽光譜的數(shù)量。除此之外，DetergentOUT™ GB-S10柱子對于去污劑有高度的結合容量，比如每毫升固定的樹脂可以結合6mg SDS和14mg Triton® X-100。

常見去污劑的選擇：

Table 1:  A comparison of the detergent removal rates and percentage protein recovery with DetergentOUT^™ GBS10.

華雅思創(chuàng)生物—G-Biosciences全國授權代理

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