細胞培養(yǎng)基的質(zhì)量標準和檢測方法：

　　澄清度

　　水是細胞培養(yǎng)基的溶劑。細胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分只有*溶解于水才能被細胞吸收攝取，細胞才能生長增殖，因此細胞培養(yǎng)基是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。該項目是通過對水溶解后的細胞培養(yǎng)基的澄清度檢查，判斷細胞培養(yǎng)基的澄清度。 按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄Ⅸ B進行。

　　pH 值

　　哺乳類動物細胞生長需要合適的酸堿度，pH過高或者過低都會導致細胞死亡。pH值的測定也可以檢查細胞培養(yǎng)基的批間差。清大天一標準規(guī)定取規(guī)定量供試品，用注射用水（水溫20℃-30℃）溶解至1L，加入規(guī)定量碳酸氫鈉到上述溶液中，用與細胞培養(yǎng)基溶液pH值相近的兩點標準緩沖液校準后的酸度計進行測定。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄Ⅵ H進行；加入規(guī)定量的碳酸氫鈉到上述溶液中，按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄Ⅵ H進行

　　干燥減量的質(zhì)量分數(shù)

　　細胞培養(yǎng)基具有吸濕性，在空氣中放置水分會很快升高，干燥減量的質(zhì)量分數(shù)表示產(chǎn)品中含濕量。細胞培養(yǎng)基是有菌制劑，其豐富的營養(yǎng)成分有利于微生物生長，控制細胞培養(yǎng)基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持細胞培養(yǎng)基的養(yǎng)分。按中華人民共和國藥典2005 年版二部附錄Ⅷ L 干燥失重測定法進行。

　　滲透壓

　　溶劑通過半透膜由低濃度向高濃度溶液擴散的現(xiàn)象稱為滲透，阻止?jié)B透所需施加的壓力，稱為滲透壓。細胞必須生活在等滲環(huán)境中，動物細胞借助K＋、Na＋維持滲透平衡。大多數(shù)細胞對滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過高容易使細胞脫水wei縮，培養(yǎng)液滲透壓過低容易使細胞膨脹破裂，因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華人民共和國藥典2005 年版二部附錄Ⅸ G 滲透壓摩爾濃度測定法進行。

　　細菌內(nèi)毒素

　　細菌內(nèi)毒素是許多病原性細菌所產(chǎn)生的毒素。它的特殊性在于不是細菌或細菌的代謝產(chǎn)物，而是細菌死亡或解體后才釋放出來的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基細菌內(nèi)毒素過高，對生物制品疫苗（如狂犬、乙肝疫苗）、基因工程藥品等注射用的藥品都需要檢查細菌內(nèi)毒素。 因此本項目的檢驗符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規(guī)細胞培養(yǎng)基的細菌內(nèi)毒素標準定為＜10 EU/ml。稱取本品規(guī)定量（見表4-12）的1/100，加入細菌內(nèi)毒素檢查用水10 mL溶解，吸取該溶液0.1 mL加細菌內(nèi)毒素檢查用水3.9 mL，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005 年版二部附錄Ⅺ E 細菌內(nèi)毒素檢查法中的凝膠法進行。

　　微生物限度

　　細胞培養(yǎng)基不是無菌產(chǎn)品，其中的微生物在一定條件下會吸收細胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖，導致細胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效。控制細胞培養(yǎng)基中細菌和霉菌，是延長細胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華人民共和國藥典》2005版二部附錄第100頁的口服給藥制劑的微生物限度標準，并嚴于該標準，規(guī)定細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的細菌數(shù)每1g不得超過200個，霉菌數(shù)每1g不得超過50個。

　　稱取樣品1 g，加入無菌純化水10 mL溶解，混勻即得試樣。按中華人民共和國藥典2005年版二部附錄Ⅺ J 微生物限度檢查法進行，檢查項目為細菌數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。

　　細胞生長試驗

　　這是一個性能特性表述的要求。細胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類動物細胞，因此經(jīng)過細胞培養(yǎng)效果的檢驗是產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣的直觀表述，這也是很多生物制藥用戶要求的一項指標。目前國內(nèi)尚無細胞培養(yǎng)和計數(shù)的法定方法，可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術》中細胞計數(shù)fa論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進行細胞培養(yǎng)，前四天用含10％小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)并計數(shù)，檢查細胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)并計數(shù)，檢查細胞培養(yǎng)基中是否有不利細胞生長的毒素。本試驗用細胞為VERO細胞。

　　細胞培養(yǎng)液的儲存，細胞培養(yǎng)液的儲存條件一般為2－8℃、密閉、避光保存，但要注意如下幾點：

　　1） 過濾后的*培養(yǎng)液，即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培養(yǎng)液要盡快使用，一般在2－3周內(nèi)使用完。培養(yǎng)液中的L-谷氨酰胺是不穩(wěn)定的，不同溫度L－谷氨酰胺的降解。

　　2） 滅菌后的未加L-谷氨酰胺等添加劑的培養(yǎng)基溶液，一般可在4℃保存6～9個月，也可冷凍保存，用時解凍

　　3） 高壓除菌后的培養(yǎng)基應置4℃保存，不能因為其可耐受高溫而忽略儲存溫度。

　　4） 添加某些生長因子、激素等添加物，可能會改變培養(yǎng)液的儲存條件，比如溫度、時間等方面的要求