轉(zhuǎn)染效率低？這份細(xì)胞轉(zhuǎn)染攻略，快收藏了吧！

從導(dǎo)入的核酸存在于宿主細(xì)胞的時(shí)間長(zhǎng)短，可將轉(zhuǎn)染分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（transient transfection）：指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過(guò)某種方式導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細(xì)胞自身的基因組上。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的基因表達(dá)是快速且短暫的，通常只能維持幾天。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于快速檢測(cè)基因功能或蛋白質(zhì)表達(dá)，例如了解基因沉默、抑制性RNA和小規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)等。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（Stable transfected）：將外源DNA整合到宿主細(xì)胞的基因組中，這種整合過(guò)程需要更長(zhǎng)時(shí)間和更復(fù)雜的操作。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的基因表達(dá)是長(zhǎng)期且穩(wěn)定的，因?yàn)橥庠椿驎?huì)被傳遞給子代細(xì)胞。這種轉(zhuǎn)染方式主要用于長(zhǎng)期表達(dá)目標(biāo)基因的實(shí)驗(yàn)，例如生產(chǎn)重組蛋白、進(jìn)行基因敲除或敲入等研究。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染也用于藥物篩選、研究形態(tài)變化、抗生素耐藥性等領(lǐng)域。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染通常可分為三類途徑分別為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)。

物理介導(dǎo)：電穿孔法、顯微注射和基因槍等

化學(xué)介導(dǎo)：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)技術(shù)等

生物介導(dǎo)：病毒介導(dǎo)，逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒等

問(wèn)題來(lái)了，該怎么選擇合適的轉(zhuǎn)染方法呢？

小編對(duì)這三個(gè)途徑的常用方法進(jìn)行了總結(jié)，記得給小編點(diǎn)個(gè)收藏hahaha~

物理介導(dǎo)——電穿孔法

原理：電流能夠擊穿細(xì)胞膜形成瞬時(shí)的水通路或膜上小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi)。

優(yōu)點(diǎn)：原理簡(jiǎn)單；不需要載體。

缺點(diǎn)：需要特殊設(shè)備，電流對(duì)細(xì)胞傷害非常大。

化學(xué)介導(dǎo)——脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染

原理：陽(yáng)離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，與核酸的磷酸根通過(guò)靜電作用，將DNA分子進(jìn)行包裹，形成DNA脂復(fù)合物，能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附，再通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。

優(yōu)點(diǎn)：操作比較簡(jiǎn)單，轉(zhuǎn)染效率高。

缺點(diǎn)：需要進(jìn)行條件優(yōu)化；有些細(xì)胞體系不易轉(zhuǎn)染；對(duì)血清敏感；價(jià)格較高。

化學(xué)介導(dǎo)——陽(yáng)離子聚合物

原理：與脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染原理相似，都是利用陽(yáng)離子與核酸結(jié)合成復(fù)合物，利用細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。

優(yōu)點(diǎn)：在血清內(nèi)穩(wěn)定；對(duì)細(xì)胞毒性相對(duì)較低；轉(zhuǎn)染率高；性價(jià)比高。

缺點(diǎn)：需要對(duì)體系進(jìn)行條件優(yōu)化；有些細(xì)胞體系不易轉(zhuǎn)染。

生物介導(dǎo)——病毒感染

原理：通過(guò)侵染宿主細(xì)胞從而將外源基因?qū)氲郊?xì)胞中。

優(yōu)點(diǎn)：高轉(zhuǎn)染率；適用性廣。

缺點(diǎn)：需要對(duì)體系進(jìn)行條件優(yōu)化；需要構(gòu)建病毒載體，步驟較為復(fù)雜。

然而，一種方法不會(huì)適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)，理想的轉(zhuǎn)染方法應(yīng)該根據(jù)自己的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需求來(lái)選擇。合適的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法應(yīng)具有高轉(zhuǎn)染效率，低細(xì)胞毒性和對(duì)正常生理學(xué)的影響最小，且易于使用和可重復(fù)性等特點(diǎn)。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率往往受到很多因素的影響，從細(xì)胞類型、細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié)，都需要考慮，所以細(xì)胞轉(zhuǎn)染是一個(gè)常規(guī)但并不簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)。在進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要注意以下事項(xiàng)：

細(xì)胞狀態(tài)：確保細(xì)胞處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)，并在轉(zhuǎn)染前處于指數(shù)生長(zhǎng)期。

轉(zhuǎn)染試劑選擇：根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)染試劑。

DNA/RNA質(zhì)量：使用高質(zhì)量的DNA或RNA，并確保其大小適宜。

轉(zhuǎn)染時(shí)間：根據(jù)細(xì)胞類型和轉(zhuǎn)染試劑確定最佳的轉(zhuǎn)染時(shí)間。

健康細(xì)胞培養(yǎng)物和操作：保持細(xì)胞健康，避免RNA酶和其他污染源的污染。

純化RNA：在轉(zhuǎn)染前，使用適當(dāng)?shù)姆椒兓疪NA，以去除多余的核苷酸、小的寡核苷酸、蛋白和鹽離子。

避免RNA酶污染：確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境中沒(méi)有RNA酶，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

重復(fù)實(shí)驗(yàn)：為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性，需要進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

轉(zhuǎn)染效率檢測(cè)：轉(zhuǎn)染完成后需要對(duì)轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正確的分析和解釋，避免因誤判而得出錯(cuò)誤的結(jié)論。

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