轉染效率低？這份細胞轉染攻略，快收藏了吧！

從導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短，可將轉染分為瞬時轉染和穩定轉染。

瞬時轉染（transient transfection）：指將構建好的質粒通過某種方式導入到哺乳動物細胞內，該質粒上的外源基因不整合到細胞自身的基因組上。瞬時轉染的基因表達是快速且短暫的，通常只能維持幾天。這種轉染方式主要用于快速檢測基因功能或蛋白質表達，例如了解基因沉默、抑制性RNA和小規模蛋白質生產等。

穩定轉染（Stable transfected）：將外源DNA整合到宿主細胞的基因組中，這種整合過程需要更長時間和更復雜的操作。穩定轉染后的基因表達是長期且穩定的，因為外源基因會被傳遞給子代細胞。這種轉染方式主要用于長期表達目標基因的實驗，例如生產重組蛋白、進行基因敲除或敲入等研究。穩定轉染也用于藥物篩選、研究形態變化、抗生素耐藥性等領域。

細胞轉染通常可分為三類途徑分別為物理介導、化學介導和生物介導。

物理介導：電穿孔法、顯微注射和基因槍等

化學介導：如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法和多種陽離子物質介導技術等

生物介導：病毒介導，逆轉錄病毒、腺病毒等

問題來了，該怎么選擇合適的轉染方法呢？

小編對這三個途徑的常用方法進行了總結，記得給小編點個收藏hahaha~

物理介導——電穿孔法

原理：電流能夠擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內。

優點：原理簡單；不需要載體。

缺點：需要特殊設備，電流對細胞傷害非常大。

化學介導——脂質體轉染

原理：陽離子脂質體表面帶正電荷，與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子進行包裹，形成DNA脂復合物，能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過細胞內吞進入細胞。

優點：操作比較簡單，轉染效率高。

缺點：需要進行條件優化；有些細胞體系不易轉染；對血清敏感；價格較高。

化學介導——陽離子聚合物

原理：與脂質體轉染原理相似，都是利用陽離子與核酸結合成復合物，利用細胞內吞進入細胞內。

優點：在血清內穩定；對細胞毒性相對較低；轉染率高；性價比高。

缺點：需要對體系進行條件優化；有些細胞體系不易轉染。

生物介導——病毒感染

原理：通過侵染宿主細胞從而將外源基因導入到細胞中。

優點：高轉染率；適用性廣。

缺點：需要對體系進行條件優化；需要構建病毒載體，步驟較為復雜。

然而，一種方法不會適用于所有的細胞和實驗，理想的轉染方法應該根據自己的細胞類型和實驗需求來選擇。合適的細胞轉染方法應具有高轉染效率，低細胞毒性和對正常生理學的影響最小，且易于使用和可重復性等特點。

細胞轉染效率往往受到很多因素的影響，從細胞類型、細胞培養條件和細胞生長狀態，到轉染方法的操作細節，都需要考慮，所以細胞轉染是一個常規但并不簡單的實驗。在進行轉染實驗時，需要注意以下事項：

細胞狀態：確保細胞處于良好的生長狀態，并在轉染前處于指數生長期。

轉染試劑選擇：根據細胞類型和實驗目的選擇適當的轉染試劑。

DNA/RNA質量：使用高質量的DNA或RNA，并確保其大小適宜。

轉染時間：根據細胞類型和轉染試劑確定最佳的轉染時間。

健康細胞培養物和操作：保持細胞健康，避免RNA酶和其他污染源的污染。

純化RNA：在轉染前，使用適當的方法純化RNA，以去除多余的核苷酸、小的寡核苷酸、蛋白和鹽離子。

避免RNA酶污染：確保實驗環境中沒有RNA酶，防止對實驗結果產生影響。

重復實驗：為了確保實驗結果的可靠性和可重復性，需要進行多次重復實驗。

轉染效率檢測：轉染完成后需要對轉染效率進行檢測，對實驗數據進行正確的分析和解釋，避免因誤判而得出錯誤的結論。

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