核酸純化試劑的使用方法和注意事項

　　01、保持核酸分子一級結構的完整性

　　02、盡量排除其他分子的污染，保證核酸樣品的純度

　　細胞分裂

　　1、物理作用：低滲透分解、超聲波分解、凍融分解、研磨、勻漿等。 用玻璃珠、超聲波、研磨等方法破碎細胞;

　　2、化學作用： CTAB法、SDS處理等;

　　烷基三甲基溴銨是陰離子清除劑，溶解細胞膜，與核酸形成復合體。 該復合體可溶于高鹽溶液，可用有機溶劑提取，去除蛋白、多糖、酚類等雜質后，加入乙醇沉淀，從而分離核酸。

　　堿分解法是質粒DNA的常用提取方法。 染色體DNA遠大于質粒DNA分子，染色體DNA為線狀分子，而質粒DNA為共價鍵環狀分子。 用堿處理DNA溶液時，線狀染色體DNA容易變性。 共價鍵環狀質粒DNA恢復中性PH后恢復天然構象，變性染色體DNA的片段與變性蛋白質和細胞片段結合沉淀，成為具有復性的超螺旋質粒DNA

　　3、酶作用：加入溶菌酶和蛋白酶等

　　在純化具有細胞壁的微生物樣本時，加入溶菌酶等溶解細胞壁，進行以下分離和純化。 蛋白酶k是從白色中分離出來的強力蛋白溶解酶，用于清除核酸酶和其他蛋白污染。

　　分離和純化

　　1、加入濃鹽溶液：鹽濃度不同的溶液中，DNA、RNA的溶解度不同

　　2、加入SDS :將核酸從蛋白質上游分離出來

　　3、萃取：疏水性蛋白在有機相中，核酸殘留在上層水相中

　　4、硅膠吸附：硅膠膜吸附核酸

　　5、磁珠吸附：利用磁珠選擇性吸附核酸

　　分離方法的優缺點：

　　1、RNA回收效率高、耗時長、不利于自動化，也不利于基因組DNA污染

　　2、鹽析法：產量低，不適合自動提取

　　3、硅膠吸附法：純度高、簡單方便、無毒性、可自動化

　　4、磁珠吸附法：產量高、純度好，可以實驗特異種的核酸分離，可以自動化

　　5、加熱煮沸法：只用于純化DNA，成本低、純度低、產量低

　　清洗和溶解

　　清洗：進一步除去雜質，通常使用75%乙醇

　　溶解：一般使用無核酸酶水或TE緩沖液