DMSO細胞凍存保護劑-二甲基亞砜

二甲基亞砜是一種重要的滲透型細胞保護劑。在深低溫(零下200度)保存細胞時凍存過程中，為防止細胞內液冰晶形成、滲透壓改變、細胞結構紊亂等導致的損傷，有必要使用含有DMSO冷凍保護劑。DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞中，降低冰點、延緩凍存過程，同時提高細胞內離子濃度，減少細胞內冰晶的形成，從而減少細胞損傷。華雅思創代理二甲基亞砜及相關的細胞培養耗材BD凍存管等，更多干細胞耗材盡在【干細胞搜網】-www.stemcell.so

上海華雅思創生物公司主要在中國代理銷售BD、Bio-Rad、GE、NUNC、Nalgene、PALL（頗爾公司）、Axygen、GEB等品牌的實驗耗材類產品 ；在中國代理銷售BD、GE、StemRD、Roche、R&D、Bio-Rad、LONZA、Cygnus、ExCell、ALPCO、Amresco等生物試劑類產品；在中國代理銷售Bio-Rad、BRAND、 HEROS等生物儀器類產品。

深低溫時二甲基亞砜的細胞毒性受到抑制。復蘇時動作要快，盡快洗掉二甲基亞砜，否則會造成對細胞嚴重的毒性。二甲基亞砜(DMSO)是目前的細胞凍存保護劑，但也是一種以細胞毒性很大的化學試驗劑。研究結果表明，培養液中DMSO濃度為10%時，細胞生長抑制率近100%;1‰濃度時抑制率為35%，即使是0.04‰的濃度，DMSO對細胞的生長也有不利的影響。

華雅思創提示：培養細胞時為防止以下問題，細胞將做冷凍保存:*、株化細胞產生性狀轉變(transformation)。第二、污染。第三、株化細胞之增殖或生理特性有特定之限制，只能在一定的代數范圍內進行增殖培養或進行特定實驗。目前可能解決這些困難的方法其中之一是細胞冷凍保存法，將冷凍細胞儲于冷凍管中，將其中一部分拿出來做一些必要的檢查，其它的冷凍細胞則在需要時拿出來解凍，用來進行實驗。本方法亦可節省繼代培養時所花費的勞力、物力，并可防止培養中經常發生意外事故，喪失細胞珠。因此冷凍保存法為細胞培養研究上之基本技術之一。

華雅思創[說明] :

1.經過冷凍保存后的細胞，其生存率會下降，冷凍時之冷卻速度，保存溫度，解凍時升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類、濃度等都可影響細胞存活率。

2. 一般而言，4℃以下慢慢地冷凍，保存于液態氮中(-196℃)。

3. 37℃快速解凍。

4.保護劑(抗凍劑)：添加甘油 (glycerol) ( I0 %左右 ) 或dimethy1sulfoxide (DMSO) ( 5- 10% ) 。

5.有些細胞如果采用上述的方法時，無法得到高的存活率。此時，則必需考慮可能傷害細胞的機制，添加劑之作用等而來找出適當的條件來修正。

華雅思創[材料] :

1.增殖期之細胞 (9成滿)，培養于培養皿中數個。

2.冷凍用培養基(2倍) : 培養基內加入三倍血清及15% DMSO，保存在冰箱中。

3. 冷凍管、保利龍制容器、鋁制ample支持棒。

華雅思創[步驟]:

1.準備2 x 107cells/ml的細胞懸浮液。

2.冷凍用培養基(2倍) :以微溫水溶解DMSO，在培養基中混合為15% (v/v)。這是DMSO的二倍濃度之溶液。必須在進行實驗前在行配制，配好后放在冰箱中，使用量必須和細胞懸浮液的量相等;使用時維持在4℃。

3.分裝: 在冷凍管管中分別加0.5ml (1/2冷凍管體積)冷凍用培養基(2倍)及2 x 10(7次方)cells/ml的細胞懸浮液;等量混合。將蓋子扭緊后，在管中部貼上膠帶密封。

4.記載卷標 : 用抗凍marker pen在冷凍管上寫明細胞名稱、代數、冷凍的年，月，日等所需要的項目。

5.放進冷卻的保利龍容器中，而在- 80℃的超低溫槽中放置一個晚上。

6.放進液態氮容器中及保存 : 在支持棒上裝上冷凍管，迅速地放進容器內。