康為世紀 CW2105S 無內毒素質粒中提試劑盒

產品名稱：康為世紀 CW2105S 無內毒素質粒中提試劑盒

產品貨號：CW2105S

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產品介紹：

　內毒素是質粒提取中常見的污染物，由于真核細胞對內毒素非常敏感，因此，如果質粒中含有內毒素會大大降低真核細胞轉染效率。本試劑盒提供一種簡單、快捷、高效提取無內毒素質粒的新方法，提取的質粒最大限度去除內毒素，并能有效去除基因組DNA、RNA、蛋白等污染。

　　本試劑盒適合提取5-15ml菌液，在堿裂解法裂解細胞的基礎上通過新型硅基質膜高效專一的結合質粒DNA，每個吸附柱最高可吸附100 μg的質粒DNA，同時采用特殊的緩沖液系統(tǒng)和除內毒素過濾柱，有效去除內毒素、蛋白等雜質。由本試劑盒所得質粒純度高、質量穩(wěn)定，特別適用于細胞轉染，同時也可用于DNA測序，PCR，基于PCR的突變，體外轉錄，轉化細菌，內切酶消化等下游實驗。

額外試劑要求：

無水乙醇，異丙醇。

產品組分：

實驗前準備：

1．所有組分可在干燥、室溫（15-30℃）環(huán)境穩(wěn)定保存1年，更長時間保存可置于2-8℃，加入RNase A的Buffer P1 置于2-8℃可穩(wěn)定保存6個月。

2．第一次使用前，將RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混勻，置于2–8℃保存，使用前需在室溫中放置一段時間，恢復至室溫后使用。

3．第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明在Buffer PW中加入無水乙醇。

4．使用前請先檢查Buffer P2 和Buffer E3是否出現(xiàn)結晶或沉淀，如有結晶或沉淀現(xiàn)象，可在37℃水浴幾分鐘，即可恢復澄清。

5．注意不要直接接觸Buffer P2和Buffer E3，使用后應立即蓋緊蓋子。

6．提取質粒的量和純度與細菌培養(yǎng)濃度、菌株種類、質粒大小、質粒拷貝數(shù)等因素有關。

使用說明：

1．取5-15 ml過夜培養(yǎng)的菌液，加入離心管（自備）中，13,000 rpm（~16,200×g）離心1分鐘收集細菌，盡量吸棄全部上清。

2．向留有菌體沉淀的離心管中加入500 μl Buffer P1（請先檢查是否已加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器充分混勻，懸浮細菌沉淀。

3．向離心管中加入500 μl Buffer P2，溫和地上下顛倒混勻8-10次，使菌體充分裂解，室溫放置3-5分鐘。此時溶液應變得清亮粘稠。

4．向離心管中加入500 μl Buffer E3，立即上下顛倒混勻8-10次，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀，室溫放置5分鐘。13,000 rpm離心5分鐘，吸取上清，將上清加入過濾柱（Endo-RemoverFM）中（已裝入收集管），13,000 rpm離心1分鐘過濾，將收集管中的濾液轉移到離心管（自備）中。

5．向濾液中加入450 μl異丙醇，上下顛倒混勻。

6．柱平衡：向已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns DL）中加入200 μl Buffer PS，13,000 rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

7．將步驟5中濾液與異丙醇的混合溶液轉移到平衡好的吸附柱（已裝入收集管）中。

8．13,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9．向吸附柱中加入750 μl Buffer PW（請先檢查是否已加入無水乙醇），13,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液。

10.將吸附柱重新放回收集管中，13,000 rpm離心1分鐘。

11.將吸附柱置于一個新的離心管（自備）中，向吸附膜的中間部位加入100-200 μl Endo-Free Buffer EB，室溫放置2-5分鐘，13,000rpm離心2分鐘。-20℃保存質粒。

保存條件：室溫（15-30℃）

產品名稱：康為世紀 CW2105S 無內毒素質粒中提試劑盒

產品貨號：CW2105S

產品訂購信息：

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康為世紀  CW2105S  EndoFree Plasmid Midi Kit     50 preps