關于新藥研發中 宿主細胞蛋白 那些事

宿主細胞是生產諸如重組蛋白、抗體和疫苗類藥物的上游材料，不同用途的藥物會采用不同的宿主細胞，重組蛋白類藥物常用的細胞有中國倉鼠卵巢細胞（CHO），新型疫苗常采用非洲綠猴腎細胞（Vero）、犬腎細胞 （MDCK）、昆蟲細胞、人二倍體細胞，傳統疫苗還會采用大腸桿菌、雞胚等作為宿主細胞。

宿主細胞蛋白如果殘留在藥物制劑中，會引起人體的免疫應答——過敏反應，如：發熱、水腫，甚至休克等。人體的免疫應答性質和效果，會受到HCPs的濃度、數量和個體免疫系統差異影響而不同。藥物監管部門最關注患者用藥的安全性，所以HCPs的監控變得越來越重要。作為藥企來說，藥物研發周期很長，成功率也很低，投入和產出不是直接劃等號的，因此在藥品研發的中后期，藥企也會非常關注生產工藝設計過程中HCPs的控制。因為，藥物中HCPs殘留量會影響臨床試驗效果，國外曾有報道，由于藥企開發的新藥在臨床實驗中出現免疫反應，導致臨床實驗推遲、擱置或重新設計工藝，如：易普森公司，凝血因子9(IB1001) 臨床實驗在2012年被擱置，2017才獲批。

藥品即使被成功開發，但如果想進入不同國家的市場，還要達到當地藥物監管部門的標準，所以藥企都會遵照不同國家藥典要求，嚴格建立HCP監控體系。中華人民共和國藥典2010年版第三部就明確規定CHO細胞殘余蛋白占總蛋白含量要小于0.05%以下；對Vero細胞殘余蛋白會隨不同產品而異，ELISA方法檢測法每個劑量不高于2微克或4微克。美國FDA認為可以接受的范圍為1-100/100萬，即1-100個PPM。

當前，廣泛被使用于HCP檢測的方法是雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）。在藥物研發中，通常會建立通用和專屬的HCP ELISA方法。前期可以采用通用HCP ELISA試劑盒。到臨床實驗時，藥企會采用專屬試劑盒，即工藝特異HCP ELISA試劑盒，需要單獨純化HCP蛋白，免疫篩選抗體。

HCP ELISA的原理是先將HCP抗體包被酶標板，孵育待測樣品，通過HCP抗體捕獲和富集樣品中HCPs，再加入與包被酶標板的抗體種屬不同的，酶聯報告基團的HCP抗體，結合已被富集的HCPs，通過底物顯色或熒光的方式成像，最終定量計算HCPs。

HCP ELISA的方法具有特異性強、靈敏度高、通量大和使用方便等特點，但也存在風險：

ELISA方法能夠富集的HCPs至少要具有兩個及以上的表位。

當兩個表位被抗體結合時，不能存在空間位阻。

ELISA酶標板包被的抗體結合量低，會限制HCP檢出限。

不是所有HCPs都可以作為抗原產生抗體，因此會有“漏檢”，所以需要評估HCP ELISA抗體的覆蓋率（Coverage）。

Cygnus HCP測定法被用作行業的參考方法，或支持商業化生物制劑的制造和質量控制（QC），因此其質量聲譽享譽業界和監管機構。

各種細胞系用于生產治療性單克隆抗體和重組蛋白，下一代重組疫苗以及用于細胞和基因療法的病毒載體。Cygnus為幾乎所有表達平臺提供HCP ELISA。BHK HCP ELISA，HEK293 HCP ELISA，PER.C6 ® HCP ELISA，非洲綠猴腎細胞HCP ELISA，將HeLa HCP ELISA，CHO HCP ELISA 3G，NS / 0 HCP ELISA，SP2 / 0 HCP ELISA，大腸桿菌HCP ELISA，巴斯德畢赤酵母HCP ELISA和其他細胞系HCP ELISA用于治療性單克隆抗體和重組蛋白生產的過程開發和最終產品質量控制。